液相色譜儀的正確操作

液相色譜儀的系統(tǒng)由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。與經(jīng)典的液相色譜相比，具有液相所用的固定相粒度小（５ｕｍ-１０ｕｍ）、傳質(zhì)快、柱效高的優(yōu)勢。近年來，在保健食品功效成分、營養(yǎng)強化劑、維生素類、蛋白質(zhì)的分離測定等應用廣泛。世界上約有８０％的有機化合物可以用ＨＰＬＣ來分析測定。

液相色譜的分離過程 ＨＰＬＣ，借溶質(zhì)在兩相間分配系數(shù)、親和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差別使不同溶質(zhì)得以分離。

液相色譜儀操作步驟：

1)過濾流動相，根據(jù)需要選擇不同的濾膜。
2)對抽濾后的流動相進行超聲脫氣10-20分鐘。
3)打開HPLC工作站(包括計算機軟件和色譜儀)，連接好流動相管道，連接檢測系統(tǒng)。
4)進入HPLC控制界面主菜單，manual，進入手動菜單。
5)一段時間沒用，或者換了新的流動相，需要先沖洗泵和進樣閥。沖洗泵，直接在泵的出水口，用針頭抽取。沖洗進樣閥，需要在manual菜單下，先purge，再start，沖洗時速度不要超過10ml/min。
6)調(diào)節(jié)流量，初次使用新的流動相，可以先試一下壓力，流速越大，壓力越大，一般不要超過2000。injure，選用合適的流速，on，走基線，觀察基線的情況。
7)設計走樣方法。file，選取selectusersandmethods，可以選取現(xiàn)有的各種走樣方法。若需建立一個新的方法，newmethod。選取需要的配件，包括進樣閥，泵，檢測器等，根據(jù)需要而不同。選完后，protocol。一個完整的走樣方法需要包括：a.進樣前的穩(wěn)流，一般2-5分鐘；b.基線歸零；c.進樣閥的loading-inject轉(zhuǎn)換；d.走樣時間，隨不同的樣品而不同。
8)進樣和進樣后操作。選定走樣方法，start。進樣，所有的樣品均需過濾。方法走完后，postrun，可記錄數(shù)據(jù)和做標記等。全部樣品走完后，再用上面的方法走一段基線，洗掉剩余物。
9)關機時，先關計算機，再關液相色譜。